В настоящий момент в диагностике опухолевого процесса все большее значение приобретают методики, обладающие специфичностью в отношении определенных типов опухолей. Так называемый персонализированный подход заключается в индивидуальном подборе лекарственных препаратов с учетом генетических особенностей опухоли. Для этого исследуют опухолевую ДНК в образцах крови, что позволяет провести дифференциальную диагностику без необходимости выполнения инвазивных процедур.
В истории применения таких методик ключевым событием стало введение в практику первого генетического тестирования крови в США. Его целью явилось определение мутаций в гене рецептора EGF (эпидермального фактора роста) для диагностики немелкоклеточного рака легких. Первично применение генетических тестов стало переломным моментом в тактике ведения пациентов, страдающих онкозаболеваниями дыхательной системы. Впоследствии генетическое типирование ДНК опухолевых клеток стало применяться в диагностике и лечении солидных опухолей других локализаций и в онкогематологии.
Комплексное геномное профилирование опухоли представляет собой тест, при котором исследуют порядка 500 различных генов, ассоциированных с развитием опухолей. В исследовании возможно определить практически все виды генетических перестроек (точечные мутации, инсерции, делеции, амплификации и транслокации), а также микросателлитную нестабильность и опухолевую мутационную нагрузку. В основе исследования лежит методика секвенирования нового поколения, позволяющая определить все классы вышеуказанных молекулярных изменений для большого количества описанных онкогенов.
Информация, полученная по результатам генетического тестирования, предоставляет широкий спектр возможностей по выбору альтернативных вариантов терапии совместно с классическими методиками, а также позволяет определить группы риска, составить прогноз заболевания, обнаружить минимальную остаточную болезнь, оценить молекулярную гетерогенность опухоли и выявить приобретенную лекарственную устойчивость.
Показания к применению генетического профилирования ДНК довольно широкие, но наибольшее значение эта методика приобретает для группы пациентов в случаях, когда тканевая биопсия невозможна, либо количество опухолевой ткани недостаточно для ее проведения. Также неинвазивные генетические тесты могут быть назначены при прогрессировании основного опухолевого процесса для поиска новых возможностей терапии, особенно в случаях неэффективности применения стандартных схем. Для пациентов с саркомами генетические исследования циркулирующей опухолевой ДНК имеют особое значение ввиду низкой эффективности классических подходов.
При таком стремительном развитии новых диагностических возможностей по-прежнему требует решения ряд вопросов преаналитической подготовки биоматериала. Наибольшие сложности у специалистов вызваны выбором общего алгоритма взятия крови, оптимальной пробирки и способа сохранения клеток для исследования. В настоящий момент «пробирками выбора» являются вакуумные пробирки, содержащие ЭДТА. Однако малый срок хранения образцов в них существенно ограничивает возможности использования таких пробирок в лабораторной практике. В связи с этим в современной действительности многие производители вакуумных систем прицельно разрабатывают пробирки, предназначенные именно для генетических тестов, цель которых заключается в достижении максимально возможной стабилизации клеток, блокировании процессов клеточного повреждения и ингибировании выхода клеточных нуклеиновых кислот в плазму. В качестве стабилизатора при изготовлении пробирок используют лимонную кислоту, натрия цитрат и декстрозу. Перечисленные компоненты представлены в системе ACD-А, применяемой в пробирках для длительного сохранения клеток – Vacuette. Достигнутая таким образом стабильность энергетического обмена клеток сохраняет состав пригодным для исследования в течение 21 дня при температуре 1-6 °C.
Несмотря на высокую специфичность профилирования опухолевой ДНК в крови, широкого применения в рутинной практике эти тесты не получили, что обусловлено недостаточным опытом в области применения новых технологий, высокой стоимостью исследования и малым количеством проведенных клинических наблюдений. Чтобы оценить возможность применения данных тестов в клинической практике, требуется проведение дальнейших исследований с использованием современных высокочувствительных методов (секвенирования нового поколения, цифровой ПЦР), а также необходимо получение достаточного практического опыта.
Для написания статьи использовались следующие источники:
Преаналитические проблемы — время для решений (mediasphera.ru)
MolRus1_08TamkovichLO (elibrary.ru)
