Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) широко используется в качестве антикоагулянта в лабораторной медицине. ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения – достаточно редкое явление, связанное с наличием ЭДТА-зависимых антитромбоцитарных антител, которые в условиях температурного диапазона от 0°C до 4°C распознают цитоадгезивные рецепторы gpIIb-IIIa, стимулируют экспрессию антигенов, запускают активацию тирозинкиназы, агглютинацию и слипание тромбоцитов in vitro, что в конечном итоге приводит к ложному снижению количества тромбоцитов. Распространенность этого явления при ЭДТА оценивается в 0,03-0,27% от общей популяции. Было замечено, что частота псевдотромбоцитопений выше у пациентов, получающих низкомолекулярный гепарин, во время госпитализации или у мужчин в возрасте 50 лет и старше.
Снижение количества тромбоцитов в анализе крови может быть неистинным, тогда оно будет отражать индивидуальные особенности пациента или будет следствием ошибки, допущенной на преаналитическом этапе (появление сгустков при условии: недостаточное или медленное переворачивание пробирок с пробами, слишком тонкая игла, большой перебор крови в пробирку (более 10%) и т.д.). Ложные снижения количества тромбоцитов могут встречаться при разных заболеваниях, в том числе аутоиммунных, хронических воспалительных заболеваниях, вирусных и бактериальных инфекциях.
Чтобы заподозрить ЭДТА-зависимую псевдотромбоцитопению, должны быть соблюдены пять основных критериев, а именно:
I. аномально низкое количество тромбоцитов, обычно < 150 (100) × 10 (9)/л;
II. появление тромбоцитопении в образцах с антикоагулянтом ЭДТА в условиях комнатной температуры, но в гораздо меньшей степени в образцах, собранных с другими антикоагулянтами и/или хранившихся в тепле при температуре ~37°C;
III. снижение количества тромбоцитов в образце с ЭДТА с течением времени;
IV. наличие агрегатов и сгустков тромбоцитов в образцах с антикоагулянтом ЭДТА при автоматическом подсчете клеток или микроскопическом анализе;
V. снижение количества тромбоцитов в пробе крови, без нарушения их функциональной активности.
Для борьбы с данным явлением существует несколько способов:
1. Поддержание температуры (нагревание) образца крови до 37°C (может привести к более точному подсчету тромбоцитов или предотвратить ЭДТА-зависимую псевдотромбоцитопению).
2. Использование добавок или специальных составов антикоагулянтов, включая забуференный цитрат натрия, гепарин, оксалат аммония, β-гидроксиэтилтеофиллин, фторид натрия, СРТ (тринатрий цитрат, пиридоксаль 5'-фосфат и трис), антиагреганты, азид калия, амикацин, канамицин или другие аминогликозиды, заместительную терапию кальцием с одновременным добавлением хлорида кальция/гепарина. Однако относиться к таким рекомендациям нужно осторожно, так как не везде есть четкая доказательная база и единство мнений исследователей. Примером может служить добавка амикацина. Нефракционированный гепарин также не рекомендуется в качестве альтернативы ЭДТА, поскольку он делает невозможным исследование мазка крови из-за образования клеточных ореолов. Наиболее часто используемым альтернативным антикоагулянтом в случае тромбоцитопении, вызванной ЭДТА, является цитрат натрия. Однако цитрат натрия находится в жидкой форме, что требует ввода коэффициента разбавления для подсчета тромбоцитов. При этом пробирку с цитратом нельзя предварительно центрифугировать. Более того, количество тромбоцитов в пробирке с цитратом нестабильно во времени и часто занижается в образцах, анализируемых более чем через три часа после взятия пробы. У некоторых пациентов (от 15% до 20%) скопления тромбоцитов могут присутствовать даже при наличии цитрата натрия. Кроме цитрата натрия можно рассмотреть еще такие альтернативные антикоагулянты, как сульфат магния и цитрат декстрозы (ACD).
3. Проведение экспресс-анализа образца крови с ЭДТА в продолжительном периоде времени, начиная с 1 минуты после взятия крови, до 4 часов после этого.
4. Флуоресцентный подсчет тромбоцитов.
5. Если сгустки тромбоцитов возникают при использовании ЭДТА и других антикоагулянтов, альтернативой является использование нативного образца цельной крови (взятие крови из пальца без антикоагулянта) для ручного подсчета.
Мнение специалиста:
ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения – хорошо известное явление in vitro, но до сих пор недостаточно распознанное. Малое количество информации о данном явлении способно стать причиной неправильной диагностики, избыточного лечения и дальнейших ненужных исследований. Поэтому нужно уметь своевременно ее распознавать и принимать соответствующие меры.
Для написания статьи использовались следующие источники:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22868791/
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7915523/
