Влияние неполного заполнения пробирок с K₂EDTA на молекулярно-биологические исследования

В настоящее время общепризнано, что преаналитические ошибки (т.е. связанные со всеми ручными действиями: от запроса на анализ до подготовки образца к исследованию) являются основным источником проблем в клинических лабораториях. Среди различных потенциальных источников внеаналитических проблем сбор недостаточного объема образца является довольно частым явлением (например, около 10% всех преаналитических ошибок) и представляет серьезную угрозу.

Целью данного исследования было изучение возможного преаналитического влияния неполного заполнения пробирок с кровью на результаты молекулярно-биологических анализов.

Методы

В исследовании приняли участие 13 здоровых добровольцев (4 мужчин и 9 женщин; средний возраст 47,3 ± 11-6 лет, диапазон от 26 до 66 лет), набранных из числа сотрудников местной службы лабораторной медицины университетской больницы Вероны (Италия).

Из периферической вены руки каждого испытуемого путем прямой венепункции с использованием одноразовой иглы 21-го калибра было собрано 11 мл цельной крови, которая затем была перенесена в три вакуумные пробирки объемом 6 мл с К2ЭДТА и распределена в различных объемах (1,5, 3,0 и 6,0 мл соответственно). После этого проводили экстракцию и анализ РНК и ДНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Автоматическая экстракция РНК проводилась с использованием набора Maxwell® ^CSC RNA Blood Kit. ДНК экстрагировали с помощью MagCorePlusII, одновременно измеряя экспрессию гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH). Концентрацию нуклеиновых кислот рассчитывали с помощью спектрофотометра NanoDrop 1000, а чистоту оценивали по соотношению абсорбции A260/280 и A260/230. Статистическая значимость устанавливалась на уровне p < 0,05.

Результаты

Результаты исследования показали, что концентрация РНК была выше в пробирках, заполненных на 1,5 и 3,0 мл крови, чем в контрольной пробирке, заполненной на 6 мл. Соотношения РНК 260/280 и РНК 260/230 существенно не различались между пробирками с разным объемом крови. Концентрация ДНК оставалась постоянной в пробирках с разным объемом крови. По сравнению с контрольной пробиркой, заполненной 6,0 мл крови, в пробирках, заполненных 1,5 мл и 3,0 мл крови, наблюдалось более низкое соотношение ДНК 260/280 нм. Соотношение ДНК 260/230 существенно не различалось ни в одной из пробирок с разным объемом крови. По сравнению с контрольной пробиркой, заполненной 6,0 мл крови, в пробирках, заполненных 1,5 мл и 3,0 мл крови, наблюдалось значительное увеличение порогового значения цикла GAPDH.