Агрегация тромбоцитов – ведущее звено первичного (сосудисто-тромбоцитарного) гемостаза.
Тромбоциты – небольшие (2-9 мкм) безъядерные плоские форменные элементы крови, образующиеся из мегакариоцитов в костном мозге. Основные функции тромбоцитов: участие в механизмах регулирования реологического состояния крови через формирование тромбоцитарных агрегатов (белый тромб), запуск реакций плазменного гемостаза и участие в репарации и регенерации поврежденных тканей благодаря выделению факторов роста (основные факторы представлены в Таблице 1).
Таблица №1
|
Тромбоцитарный фактор роста |
PDGF |
|
Трансформирующий фактор роста |
TGF-β |
|
Фактор роста эндотелия сосудов |
VEGF |
|
Фактор роста эпителия |
EGF |
|
Фактор роста фибробластов |
FGF |
|
Инсулиноподобный фактор роста |
IGF |
После взаимодействия с коллагеном на поврежденной поверхности сосуда (адгезия) или другими, уже активированными тромбоцитами (биологические активаторы: тромбин, АДФ, тромбоксан А2), тромбоцит вступает в стадию активации. Активация – это быстрый и необратимый переход в новую формацию, сопровождающийся выбросом из цитоплазмы содержимого α-гранул, плотных гранул, лизосом, а также конформационными изменениями гликопротеине IIb/IIIa, экспрессией Р-селектина и фосфатидилсерина. После активации наступает заключительный этап первичного гемостаза – агрегация, характеризующаяся образованием «мягкого» белого тромба на поврежденной поверхности сосуда.
Методы оценки агрегационной функции тромбоцитов
Метод оптической детекции агрегации тромбоцитов (light transmission aggregometry (LTA)) – классический оптический метод О’Брайна и Борна – остается «золотым стандартом» для функциональной оценки тромбоцитопатий (Born, G. V. R., & Cross, M. J. (1963). The aggregation of blood platelets. The Journal of Physiology, 168(1), 178-195. doi:10.1113/jphysiol.1963.sp007185). Метод предполагает использование различных индукторов агрегации для диагностики нарушений функции тромбоцитов, дифференциальной диагностики кровотечений и оценки эффективности терапии антиагрегантами. При использовании оптического агрегометра с фиксированной длиной волны оценивается изменение светорассеивания после агрегации тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме (PRP) в присутствии индуктора (агониста) или без него (спонтанная агрегация).
Клинические рекомендации для использования агрегации тромбоцитов:
- для лечения пациентов с симптомами кровотечения (носовое кровотечение, кровоточивость десен, длительные меноррагии и т.п.), указывающими на первичные нарушения гемостаза
(Recommendations for the standardization of light transmission aggregometry consensus of the working party from the platelet physiology subcommittee of SSC/Journal of Thrombosis and Haemostasis, 11: 1183–1189);
- для оценки ответа на антиагрегантную терапию
(Bordet, J.-C., Negrier, C., Dargaud, Y., & Quellec, S. L. (2016). Comparison of current platelet functional tests for the assessment of aspirin and clopidogrel response. Thrombosis and Haemostasis, 116(10), 638–650. doi:10.1160/th15-11-0870);
- для лечения пациентов с наследственными заболеваниями системы гемостаза (болезнь фон Виллебранда, синдром Бернара-Сулье) и, в некоторых случаях, – для пациентов с Острым коронарным синдромом (ОКС).
Сложности лабораторной диагностики агрегационной функции тромбоцитов
Несмотря на важность исследований агрегационной функции тромбоцитов, в первую очередь, для пациентов на антиагрегантной терапии (гепарин, аспирин, клопидогел, прасугрел и т.д.), количество лабораторий, выполняющих эти тесты, минимально. Это связано с несколькими факторами: с необходимостью наличия дополнительного прибора – агрегометра; с отсутствием стандартизации (даже внутри LTA) между полуавтоматическими агрегометрами; и с необходимостью получения большого количества биологического материала (цельная кровь, плазма) пациента для каждого анализа.
Автоматизация агрегометрии – высокое качество диагностики и достоверность результатов
Наличие опции «агрегометрия» на автоматическом коагулометре позволит проводить диагностику у значительно большего количества пациентов. Это достоверный факт, так как, с учетом преаналитических особенностей, при подготовке к исследованию на параметры гемостаза, максимальное время транспортировки крови in vitro до прибора не должно превышать 4 часов. То есть лаборатория должна быть «рядом» с пациентом. На приборах, сочетающих методы оценки агрегационного и плазменного звена гемостаза, эта проблема уже решена (Frère, C., Kobayashi, K., Dunois, C., Amiral, J., Morange, P.-E., & Alessi, M.-C. (2017). Assessment of platelet function on the routine coagulation analyzer Sysmex CS-2000i. Platelets, 29(1), 95–97. doi:10.1080/09537104.2017.1353683).
Наличие опции с одинаковыми протоколами исследований агрегации тромбоцитов (на автоматическом оборудовании) позволит создать общую базу данных со статистическими параметрами. Эту базу можно будет использовать как основу для стандартизации метода.
И не менее важный аспект – качество биологического материала. Как упоминалось выше, для метода LTA необходима богатая тромбоцитами плазма (PRP). Тесты оценки функциональной активности тромбоцитов зависят от качества плазмы и должны в обязательном порядке проходить проверку на преаналитическом этапе лабораторной диагностики. Например, на HIL-детекторе автоматических коагулометров Sysmex серии CS с модулем агрегации и встроенным HIL-детектором (Lawrie, A. S., Kobayashi, K., Lane, P. J., Mackie, I. J., & Machin, S. J. (2013). The automation of routine light transmission platelet aggregation. International Journal of Laboratory Hematology, 36(4), 431–438. doi:10.1111/ijlh.12161).
Компания ООО «ОМБ» предлагает тесты для автоматизированной оценки функциональной активности тромбоцитов (АДФ, коллаген, эпинефрин, ристоцетин, арахидоновая кислота) на анализаторах серии CS: CS-2000i и CS-5100, разработанных компанией «Сисмекс» (РУ № РЗН 2020/11776 от 21.08.2020; 2020/11769 от 19.08.2020; 2020/11767 от 19.08.2020; 2020/11778 от 21.08.2020).
