Моча – продукт обмена веществ, образующийся в почках в результате фильтрации жидкой части крови, а также процессов реабсорбции и секреции разных аналитов. На 96% моча состоит из воды, остальные 4% приходятся на растворенные в ней азотистые продукты обмена белков (мочевина, мочевая кислота, креатинин и др.), минеральные соли и др. вещества.
Общий анализ мочи - неотъемлемая часть рутинных лабораторных исследований, направленных в первую очередь на скрининг заболеваний органов мочевыделительной системы, поскольку патологические процессы в почках и мочевыводящих путях влияют на свойства мочи.
Общий анализ мочи включает исследование физических свойств: определение цвета, прозрачности, удельного веса мочи; определения белка, глюкозы, гемоглобина, билирубина, уробилиногена, кетоновых тел и нитритов полуколичественным методом; оценку состава осадка мочи (микроскопия осадка).
Осадок мочи делят на организованный (элементы органического происхождения – эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки, цилиндры и др.) и неорганизованный (кристалы и аморфные соли).
Компоненты мочевого осадка, особенно цилиндры, имеют большое клиническое значение для диагностики и лечения пациентов с заболеваниями почек. Для точной идентификации и классификации элементов осадка мочи требуются большой опыт и годы практики.
В большинстве лабораторий до сих пор исследование микроскопии осадка проводят визуально в нативном препарате с использованием микроскопа. Однако протоколы исследований, особенно на преаналитической фазе, немного различаются между лабораториями. Эталонного метода микроскопии осадка мочи не существует.
Преаналитический этап - наиболее уязвимая часть лабораторного процесса, на которую приходится до 75% всех лабораторных ошибок. Преаналитическая фаза состоит из нескольких подэтапов: назначение теста, подготовка пациента, сбор биоматериала, транспортировка и подготовка образца для тестирования. Несмотря на то, что лаборатория напрямую не участвует во всех этих этапах, сотрудники лаборатории несут ответственность за их правильное выполнение. Например, предоставление подробных и удобных инструкций для пациентов по подготовке к исследованию и правильному методу взятия проб. Эффективная подготовка пациента имеет решающее значение для получения качественного образца мочи. Было показано, что этап центрифугирования и остаточный объем осадка, являются большим источником ошибок на преаналитической фазе
Европейская конфедерация лабораторной медицины (ECLM) ранее опубликовала пошаговые рекомендации, в которых содержатся конкретные инструкции по методике анализа осадка мочи. Однако в зависимости от наличия оборудования в ЛПУ, расходных материалов и реагентов, лаборатории часто вносят изменения в методики.
Эти модификации включают изменение скорости центрифугирования, типа пробирок, минимального объема, необходимого для тестирования, и метода аспирации надосадочной жидкости.
Целью исследования, проведенного на базе Центральной Университетской больницы в городе Загребе, Хорватия, было сравнить протокол исследования осадка, разработанный внутри лаборатории с протоколом, рекомендованным (ECLM).
Эксперимент проводился в два этапа. На первом этапе, который был проведен в 2015 году, ученые исследовали изменение относительной центробежной силы (RCF). На втором этапе, проведенном с марта по апрель 2016 года, были рассмотрены три других модификации.
Для исследования модификации RCF было проведено сравнение 20 образцов мочи. Каждый образец брали в две пробирки с круглым и коническим дном, а затем центрифугировали при 400xg в соответствии с инструкциями, и при 1358xg в соответствии с внутренним протоколом лаборатории. Надосадочную жидкость декантировали, осадок ресуспендировали и исследовали под микроскопом.
На втором этапе было исследовано 110 образцов, 47 из которых сравнивали на предмет оптимального выбора типа пробирки (круглодонные и конические), 100 были использованы для сравнения методов удаления супернатанта и 101 были использованы для сравнения объема образца (10 мл и 5 мл).
Надосадочную жидкость удаляли одноразовыми пластиковыми пипетками. Затем осадок мочи ресуспендировали и отбирали 10 мкл образца для исследования под микроскопом.
В качестве пробирок использовали пробирки производства Greiner Bio-One. Центрифугирование производили в центрифуге Rotofix 32A, компании Hettich.
Результаты исследований показали: количество эритроцитов, лейкоцитов и клеток плоского эпителия было значительно ниже после центрифугирования при 400xg (P = 0,001, 0,002 и 0,004, соответственно).
Статистически значимой разницы в частоте обнаруженных цилиндров, лейкоцитов в скоплениях и небольших плоскоклеточных клеток между двумя режимами RCF не было.
Количество лейкоцитов было значительно ниже в конических пробирках (P = 0,010), после удаления супернатанта (P = 0,045) и в 5 мл мочи (P <0,001). Количество плоских эпителиальных клеток было значительно ниже после удаления супернатанта (P <0,001) и в 5 мл мочи (P <0,001). Количество эритроцитов (P <0,001), общих негиалиновых цилиндров (P <0,001) и частота зернистых цилиндров (P = 0,039) были значительно ниже в 5 мл мочи.
Мнение специалиста:
Исследование относительной центробежной силы подтверждает, что количество эритроцитов, лейкоцитов и плоских эпителиальных клеток значительно ниже после центрифугирования при 400g, чем после центрифугирования при 1358xg. Пиурия и гематурия являются основным признаком заболевания почек и мочевыводящих путей, поэтому ложноотрицательное количество эритроцитов и лейкоцитов может замедлить постановку диагноза заболевания мочевыводящих путей и, соответственно, причинить вред пациентам.
Что касается выбора объема образца, то ложноотрицательные результаты при меньшем объеме мочи могут привести к серьезным ошибкам в диагностике, мониторинге, ведении и терапии пациентов с почечными заболеваниями, у которых получение адекватного объема мочи заметно затруднено.
Таким образом, для получения достоверных результатов исследования осадка мочи, следует обращать внимание не только на подготовку пациента, хранение и транспортировку биологического материала, но и на условия центрифугирования, объем пробы, а также выбор пробирок и метода аспирации надосадочной жидкости.
