Принято считать, что гемолиз индуцированный in vitro влияет на большой спектр тестов в биохимии, иммунохимии и гематологии. Большинство лабораторных ассоциаций по всему миру советуют также внимательно и бережно относиться к пробам, направленным на определение параметров гемостаза. В частности, в Соединенных Штатах Америки, Европейском Союзе и некоторых странах Латинской Америки и Азии отбраковка проб с той или иной степенью гемолиза прописана в стандартах для определения протромбинового времени (ПВ), активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), Д-димера и ряда других параметров.
Проводимые ранее исследования ассоциировали влияние гемолиза с конкурентным воздействием мембранных фосфолипидов, выходящих в плазму крови, на VII активированный фактор (FVIIa) параллельно с тромбопластином. Но эмпирически подтвержденных данных по этой теории пока нет. При этом, отбраковка гемолизированных проб венозной крови приводит, как минимум, к задержке результатов исследований и, как следствие, к задержке в принятии клинических решений. С другой стороны, недостоверные результаты приводят к необходимости повторного взятия крови, дополнительным затратам медицинского учреждения на процедуру и лаборатории на тестирование и, в итоге, снова к задержке в получении достоверных результатов исследований.
Цель исследования заключалась в проверке сходимости и воспроизводимости результатов исследований параметров гемостаза в «чистой» (концентрация свободного гемоглобина ~ 0 г/дл) плазме крови и плазме крови тех же пациентов с различной степенью гемолиза, вызванной механическим способом.
Все исследования были проведены в соответствии с утвержденным протоколом совета врачей лабораторной диагностики. Кровь отбиралась в вакуумные пробирки Greiner Vacuettes, производства (Greiner-Bio-One, Monroe, NC) объемом 3,15 мл., содержащим 3,2% (109 ммоль/л) буферизированного цитрата натрия. Гемолиз определялся после центрифугирования при 2500 об/мин. в течение 15 минут. Все пробы аликвотировались попарно. Концентрация свободного гемоглобина измерялась на спектрофотометре колориметрическим методом на трех длинах волн с максимальным поглощением при 562, 578 и 598 нм. Процент гемолиза был вычислен исходя из концентрации свободного и общего гемоглобина в плазме крови и гематокрита.
Результаты исследований показали корреляцию между увеличением концентрации свободного гемоглобина в плазме крови и увеличением ТВ, уменьшением АЧТВ, увеличением концентрации Д-димера и снижением концентрации фибриногена. Необходимо также отметить, что смещение определения параметров в направлении увеличения длины волны, уменьшало зависимость между концентрацией свободного гемоглобина и изменениями параметров гемостаза.
Вывод.
Таким образом можно констатировать, что концентрация свободного гемоглобина оказывает влияние на результаты параметров гемостаза in vitro. Даже в стандартной «пятерке» тестов (ПВ, АЧТВ, Фибриноген, ТВ, Д-димер) присутствуют параметры, детекцию которых при некоторых длинах волн и даже минимальной степени гемолиза, нельзя считать достоверной.
Для решения этой проблемы существует два базовых решения:
1. Стандартизация преаналитического этапа лабораторной диагностики с целью уменьшения процента гемолизированных проб венозной крови.
2. Использование автоматизированных коагулометров с модулем «HIL-детектор» и возможным измерением параметров гемостаза на длинах волн больше 660нм.
