Вебинары

Мнение специалистов

Егорова Марина Олеговна, доктор медицинских наук

19.02.2013

Преаналитические особенности определения кальция.

Полетаева О.А.,
кандидат биологических наук

На правильность результатов определения кальция влияют как преаналитические факторы, связанные с отбором проб, так и состояние обследуемого больного (включая прием пищи, лекарственных препаратов, время отбора образцов и др.). Поэтому необходимо соблюдать регламент подготовки образцов для определения кальция в лаборатории. 

а) Способ забора крови и приготовления образца для анализа 

• Определение кальция рекомендуется проводить в свежей сыворотке крови или в гепаринизированной плазме крови. Сыворотку рекомендуется отделять от сгустка немедленно, во избежание адсорбции кальция эритроцитами in vitro (риск получения ложно заниженных результатов). Использование любых солевых и хелатирующих антикоагулянтов (фторид, тартарат, оксалат, ЭДТА) не рекомендуется, поскольку может спровоцировать связывание содержащихся в образце катионов Са2+. 

• Отбор образцов рекомендуется осуществлять в положении “лежа”, по возможности – без жгута (несоблюдение этих условий может привести к ложному завышению уровня кальция в пробе на 0,10-0,15 ммоль/л, т.е. на 5-7 % от нормальных значений). 

• Требования, предъявляемые к качеству используемой лабораторной посуды. Стеклянную посуду, использовавшуюся для определения кальция, следует прополоскать раствором соляной кислоты, а затем дистиллированной водой. Можно применять пластиковые пробирки. Нельзя использовать для приготовления растворов реагентов и отбора проб посуду, ранее использовавшуюся для определения липидов, – это может привести к ложному завышению результатов. 

• При работе на ручных и полуавтоматических анализаторах рекомендуется также выделить специальные реакционные кюветы для определения кальция. 

• При работе на автоматических анализаторах эту операцию можно заменить внесением кальция в список «несовместимых» тестов с обязательной предварительной и последующей промывкой соляной кислотой кювет на анализаторах свободного доступа (Random Access), или путем принудительного назначения теста на кальций в самое начало измерительного процесса. 

• Хранение образца. При правильных условиях отбора и подготовки проб, кальций сыворотки крови стабилен в течение суток при комнатной температуре, в течение недели – при 2-8°С, и в течение не менее чем 5 месяцев в замороженном состоянии при условии однократного замораживания-оттаивания. 

• Точное определение уровня кальция в моче, особенно в условиях патологии, может быть проведено только после полного растворения осадка, для чего образцы мочи или подкисляют до рН 3-4 путем добавления соляной кислоты, или прогревают в течение 15 мин при 60°С. 

б) Влияние качества образца на результат исследования кальция 
  • Гемолиз: определение кальция в гемолизированных образцах может привести к получению ложно завышенных результатов. 
  • Хилезные и липемические образцы: значительная липемия также может привести к ложному завышению результатов определения. 
  • Иктерические образцы: присутствие билирубина может интерферировать с регистрацией оптической плотности, поэтому определение в иктерических образцах нежелательно. 
  • Опалесцирующие растворы: теоретически, значительная опалесценция может оказывать влияние на регистрируемые значения абсорбции (таким же образом как мутность), однако значительная опалесценция раствора, скорее всего, свидетельствует о снижении качества образца (при неправильном хранении, бактериальном загрязнении и т.п.), поэтому в первую очередь возникает вопрос о правомочности использования подобного образца для анализа.                                             
Нарушения регламента подготовки приводит к тому, что патологическое повышение или занижение уровня кальция может быть диагностировано в практически нормальных пробах. 


К завышению уровня определяемого кальция может привести: 
  • неправильная подготовка проб; 
  • загрязнение лабораторной посуды вследствие использования ее для определения других параметров, особенно – липидных компонентов сыворотки крови; 
  • использование для анализа не сыворотки, а плазмы крови (особенно, если в качестве ингибиторов применяли тартарат или оксалат натрия): в этих случаях показатели могут быть значительно занижены; 
  • использование гемолизированных образцов, особенно возникших вследствие нарушения условий центрифугирования образцов крови – ложное занижение результатов может быть вызвано длительной инкубацией сыворотки вместе со сгустком и in vitro адсорбцией кальция эритроцитами сгустка; 
  • ложное завышение результатов может быть вызвано оптической интерференцией гемолизированных образцов и окрашенных комплексов, образовавшихся в результате целевой реакции; 
  • нарушение температурного режима определения. 

Кроме того, в отличие от ферментов и большинства субстратов, на содержание кальция в частности влияет целый ряд внешних факторов: потребление кальция с пищей, употребление кальцийсодержащих препаратов и др., приводящих к получению ложно завышенных и ложно заниженных результатов. 

  1. Использование диеты, обогащенной кальцием (ложное завышение) или, напротив, обедненной этим микроэлементом (полное вегетарианство приводит к получению заниженных показателей уровня кальция даже без каких-либо клинических признаков кальций дефицитного состояния).
  2. Применение больными (особенно без ведома лечащего врача) препаратов и пищевых добавок, обогащенных кальцием: для получения достоверных результатов прием таких препаратов следует прекращать не позднее, чем за 5 дней перед сдачей крови на анализ.                                                   

Таким образом, для адекватной оценки активности показателя необходимо не только правильно провести анализ, но и избежать ошибок на преаналитическом и постаналитическом этапах.